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凍存細胞一般常用胎牛血清(FBS)和二甲基亞砜(DMSO)。血清是維持細胞生存環(huán)境;DMSO是冷凍保護劑,使細胞免受低溫冰晶形成、及滲透壓改變而導(dǎo)致的物理損傷; 細胞培養(yǎng)理論上基本建議的是兩種:70%培養(yǎng)基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清 。 但經(jīng)過有些實驗室經(jīng)過對比發(fā)現(xiàn):"10%的DMSO,90%的血清"復(fù)蘇效果相對比"70%培養(yǎng)基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。 |
DMSO產(chǎn)品咱就不多說了,什么品牌都有,只要是選擇細胞培養(yǎng)級別的,效果應(yīng)該差不多。不過我用的是MP Biomedicals二甲基亞砜(DMSO),效果還可以。 對于胎牛血清的選擇就要相對謹慎了,市面上胎牛血清品牌可以說是魚龍混雜,剛看過新聞的客戶就會知道,高仿產(chǎn)品橫行。慎重起見,給大家推薦CellMax品牌胎牛血清,目前有澳洲血清(庫存緊張)和中國血源胎牛血清可供大家試用,購買。 |
細胞凍存和復(fù)蘇需要注意哪些呢? |
1、細胞本身的狀態(tài) 一般情況下細胞的復(fù)蘇還與原代細胞的活性有關(guān),如果要凍存的細胞懸液本身活性不高的話,后面復(fù)蘇的存活率也不高。 |
2、凍存細胞數(shù)量要足夠 無論你再怎么小心,細胞在冷凍和復(fù)蘇的時候都是最脆弱的,總會死掉一批。所以,一開始就要保證凍存細胞的數(shù)量足夠。 |
3、慢凍快融 一般情況下,細胞凍存時要遵循“慢凍快融"的原則。標準的降溫速度是1-2℃/min ,當溫度到達-25℃,降溫速度可加快至5-10℃/min,到-80℃可直接入液氮。有些實驗室是梯度凍存:4度,-20,-80,液氮,依次凍存。而復(fù)蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來之后,迅速放在37°C水浴中,盡快融化 |
4、注意安全 細胞凍存和復(fù)蘇是細胞培養(yǎng)技術(shù)里面最容易出事的部分。凡是和液氮接觸的操作,注意戴保護眼鏡和手套。注意:復(fù)蘇的時候,在水浴中搖搖動的時候會有爆炸的可能性。另外, DMSO是有毒致癌的。接觸的時候一務(wù)必要帶好手套。 |
5、做好標記 對于凍存細胞,一定要做好標記。如:細胞名稱、代數(shù)和凍存日期。特別是公共實驗室,更要做好標記,避免找不到自己的細胞。 |
6、DMSO是否去除 由于DMSO是一種有毒致癌物質(zhì)。那么,解凍之后,應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢?答案是no。除了極少數(shù)特別注明的對DMSO敏感的細胞外,99%的細胞都不需要去除DMSO。后面細胞培養(yǎng)中頻繁換液會慢慢去除掉DMSO。 |